ساخت پیش سازواره کربوکسی متیل سلولاز نوترکیب مقاوم به حرارت حاصل از سویه bacillus pumilus z14

آنزیم اندوگلوکاناز یک آنزیم صنعتی با کاربرد فراوان است که تولید نوترکیب آن می تواند ارزش افزوده اقتصادی قابل توجهی داشته باشد. جهت بیان نوترکیب این آنزیم از وکتور pet21b(+) به دلیل داشتن ویژگی های قابل توجه از جمله: پروموتر قوی، تحت تنظیم بودن، جایگاه پلی لینکر مناسب و تگ هیستیدینی به عنوان کاست بیانی استفاده شد. به منظور طراحی پرایمر از ناحیه orf ژن اندوگلوکاناز سویه bacillus pumilus z14 استفاده شد.قطعه حاصل از تکثیر ژن اندوگلوکاناز مطابق با ماهیت پرایمرهای طراحی شده دارای جایگاه های برشی bamhi در انتهای ?5 و ixho در انتهای ?3 بود. با وجود سه نوکلئوتید اضافی در فرادست پرایمرها، برای افزایش کارامدی برش و نگهداری کپی توالی ژنی جهت تغییرات و موتاسیو ن های توسعه دهنده عملکرد آنزیم، نیاز به تهیه پیش سازواره اولیه از ژن تکثیر شده بود که به این منظور از وکتور ptg19-t به عنوان پایه کلونینگ t/a استفاده شد.